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(1) 污染 组织培养过程要求比较高的无菌环境,组培过程中常受真菌、细菌等微生物的侵染而在培养容器中滋生,影响培养材料的正常生长和发育。在培养的各个环节都必须注意充分消毒灭菌,接种器具、接种材料、操作人员在接种操作前都应按要求严格灭菌,包括使用过的接种瓶、瓶塞等都要认真清洗、灭菌后才能再次使用。接种室、培养室、超净工作台应定期用福尔马林熏蒸,经常用紫外灯照射灭菌。
图为:核桃
(2)玻璃化 玻璃化是试管苗的一种生理失调症状,表现为试管苗叶片、嫩梢呈水浸透明或半透明状,叶片变小、畸形。玻璃苗生根困难,移裁后不易成活。它的出现使试管苗生长缓慢、繁殖系数下降。造成试管苗玻璃化的因素主要有培养基的琼脂和蔗糖浓度、培养温度、生长调节剂液度、培养瓶内的乙烯浓度、光照以及培养基中的含氮量等, 在培养过程中应予以注意。
(3)褐化 核桃的各种组织中酚类物质含量较高,在组织培养过程中,组织中的多酚氧化酶被激活,酚类化合物被氧化形成褐色的西最类物质。西昆类物质与蛋白质聚合,引起其他確系统失活,导致代谢紊乱,生长受阻。褐化现象较为严重,是核桃组培繁殖的一大瓶颈问题。
一般常用的防止褐化的措施有:选择幼嫩的外植体,分生能力强,酚类物质含量低;选择适宜的培养基;在不影响正常生长和分化的前提下,降低温度,减少光照;在培养基中添加抗氧化剂或吸附剂,如抗坏血酸、硫代硫酸钠、柠檬酸、聚乙烯吡咯烷酮、活性我等。
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